Medicentro 2011;15(2)

 

 

UNIVERSIDAD DE CIENCIAS M�DICAS

�DR. SERAF�N RUIZ DE Z�RATE RUIZ�

UNIDAD DE INVESTIGACIONES BIOM�DICAS

SANTA CLARA, VILLA CLARA

 

 

ART�CULO ORIGINAL

 

 

VALORES DE REFERENCIA DE HIERRO EN SANGRE DEL CORD�N UMBILICAL SEG�N ESPECTROFOTOMETR�A ULTRAVIOLETA VISIBLE

 

 

Por:

 

Lic. Yansy Romero Garc�a¹, MSc. Tahiry G�mez Hern�ndez², MSc. Melba Villar Vald�s³ y MSc. Leticia Cristina B�quer Mendoza⁴

______________

1.       Licenciada en Enfermer�a. Residente de cuarto a�o de Bioqu�mica Cl�nica. Departamento de Morfofisiolog�a. Facultad de Medicina. UCM-VC. e-mail: yansyrg@ucm.vcl.sld.cu

2.       Licenciada en Qu�mica. M�ster en Qu�mica Anal�tica. Aspirante a Investigador. Laboratorio de Diagn�stico Molecular de la Unidad de Investigaciones Biom�dicas. UCM-VC.

3.       Especialista de II Grado en Bioqu�mica Cl�nica. M�ster en Bioqu�mica. Departamento de Morfofisiolog�a. Facultad de Medicina. Asistente. UCM-VC.

4.       Licenciada en Biolog�a. M�ster en Bioqu�mica. Aspirante a Investigador. Laboratorio de Diagn�stico Molecular de la Unidad de Investigaciones Biom�dicas. UCM-VC.

 

 

Resumen

 

La sangre del cord�n umbilical ha sido de inter�s cient�fico en los �ltimos a�os, como un medio para obtener muestras de sangre del neonato y determinar varios par�metros que brinden una informaci�n detallada de su estado nutricional y metab�lico. Entre las t�cnicas reconocidas para la determinaci�n de hierro, el m�todo que utiliza la ferrozina resulta asequible para pa�ses en v�as de desarrollo como el nuestro. Para asegurar una correcta interpretaci�n de los resultados, es necesario establecer los valores de referencia de este mineral, teniendo en cuenta las condiciones espec�ficas de an�lisis utilizadas. El objetivo del presente trabajo es determinar los valores de referencia de hierro en muestras de sangre del cord�n umbilical de reci�n nacidos del Hospital Ginecoobst�trico �Mariana Grajales�, a trav�s del m�todo espectrofotom�trico ultravioleta visible, que utiliza la ferrozina en las condiciones de trabajo del Laboratorio de Diagn�stico Molecular de la Unidad de Investigaciones Biom�dicas. Se procesaron 91 muestras de sangre del cord�n umbilical, y se informaron valores que concuerdan con los publicados en la literatura. Estad�sticamente, la variable en estudio presenta una distribuci�n normal para reci�n nacidos masculinos y femeninos, por lo que el intervalo informado es v�lido para ambos sexos.

 

Descriptores DeCS: SANGRE FETAL HIERRO/sangre ESPECTROFOTOMETRIA ULTRAVIOLETA/m�todos

Subject headings: FETAL BLOOD IRON/blood SPECTROPHOTOMETRY ULTRAVIOLET/METHODS

 

 

Introducci�n

 

En la pasada d�cada, la sangre del cord�n umbilical qued� establecida como fuente de c�lulas madre eritropoy�ticas^1,2. En los �ltimos a�os, ha sido de inter�s cient�fico como un medio �til para la determinaci�n de varios par�metros que brindan una informaci�n detallada del estado nutricional y metab�lico del individuo al momento de su nacimiento³. Entre estos, resulta de particular importancia el hierro, elemento traza que en 1973 fue declarado por la Organizaci�n Mundial de la Salud (OMS) como mineral esencial⁴, por resultar imprescindible en un sinn�mero de procesos biol�gicos que ocurren en nuestro organismo⁵.

La homeostasis de este mineral se logra con la coordinaci�n de varios mecanismos que regulan su absorci�n, reciclaje y movilizaci�n de sus dep�sitos⁶. A pesar de esto, el organismo sufre grandes p�rdidas diarias de hierro de manera fisiol�gica,� que son mucho m�s notables en la mujer en edad f�rtil. Durante el embarazo, la eliminaci�n o depleci�n de hierro de la gestante representa m�s de tres veces el volumen de p�rdidas diarias de un hombre adulto sano⁷. Muchos estudios corroboran que los dep�sitos de hierro del feto pueden verse afectados por la magnitud de las reservas de la madre, pues este extrae hierro en cantidades proporcionales a sus necesidades de crecimiento⁸. Los niveles de hierro s�rico constituyen una medida de la cantidad de hierro unido a la transferrina, y se ven afectados en un gran n�mero de condiciones cl�nicas. Por todo esto, resulta evidente la importancia que tiene una valoraci�n temprana del estado del hierro en el neonato, para predecir el riesgo que este tendr� de padecer una ferropenia o, incluso, una anemia ferripriva despu�s de los primeros meses de vida^9,10.

Existen m�todos directos e indirectos para la estimaci�n del hierro corporal. Los directos son muy invasivos¹¹. Los indirectos, mediante los cuales se realizan mediciones del hierro contenido en el llamado �compartimento funcional�, resultan, por tanto, m�s pr�cticos. Entre estos se puede citar la determinaci�n de diferentes marcadores s�ricos, como� capacidad total de captaci�n, saturaci�n de transferrina, receptor de transferrina s�rica (sTfR) y hierro s�rico, entre otros¹².

En particular, para determinar el hierro s�rico, se han implementado t�cnicas, como la espectrometr�a de emisi�n de llama, o la espectrometr�a de masa de plasma inductivamente acoplado, pero esta tecnolog�a es muy cara y de muy dif�cil acceso para pa�ses en desarrollo. Existen tambi�n diferentes modificaciones de los m�todos colorim�tricos que han sido propuestos por los comit�s internacionales¹³. En ese caso est� el m�todo que emplea la ferrozina¹⁴. Este tipo de determinaci�n tiene como limitaci�n la gran variabilidad en sus valores, debido a m�ltiples factores fisiol�gicos y t�cnicos. Por esta raz�n, no se encuentran publicados valores de referencia para este metal, sino que se recomienda fuertemente que cada laboratorio establezca sus propios valores de referencia, para lograr una correcta interpretaci�n de sus resultados.

Con el presente trabajo nos proponemos determinar los valores de referencia de hierro en muestras de sangre del cord�n umbilical en reci�n nacidos, mediante el m�todo espectrofotom�trico ultravioleta visible (UV-Vis) que utiliza la ferrozina, en las condiciones de trabajo del Laboratorio de Diagn�stico Molecular de la Unidad de Investigaciones Biom�dicas (UNIB), en la Universidad de Ciencias M�dicas de Villa Clara �Dr. Seraf�n Ruiz de Z�rate Ruiz�.

 

 

M�todos

 

Esta es una investigaci�n b�sica aplicada. El universo de estudio lo constituyeron los reci�n nacidos en el Hospital Universitario Ginecoobst�trico �Mariana Grajales�, en Santa Clara. La poblaci�n estuvo formada por los nacidos en el per�odo comprendido entre los d�as 6 y 30 de abril del 2009, que cumplieron con los criterios de inclusi�n establecidos para el prop�sito del estudio. Se obtuvieron 96 muestras de sangre del cord�n umbilical; de ellas, se seleccionaron 91, que representaron un 34,8 % del total de reci�n nacidos en ese per�odo. De acuerdo con nuestros criterios de inclusi�n y exclusi�n, se aceptaron las muestras pertenecientes a reci�n nacidos sanos, producto de embarazos de m�s de 37 semanas de gestaci�n, con peso mayor de 2 500 g al momento del nacimiento. Se rechazaron las muestras de hijos de madres seropositivas al VIH, infectadas con hepatitis B o que tuvieran h�bitos t�xicos, as� como aquellas muestras en las que se observ� hem�lisis durante el proceso de centrifugaci�n. En todo momento se cumplieron las regulaciones �ticas establecidas¹⁵ para la investigaci�n cient�fica en muestras de origen humano. Las muestras obtenidas se llevaron al Laboratorio de Diagn�stico Molecular de la UNIB, donde fueron centrifugadas y posteriormente procesadas con el m�todo espectrofotom�trico UV-Vis, que utiliza la ferrozina como agente crom�geno, para la determinaci�n de la concentraci�n de hierro s�rico. Los reactivos empleados fueron el juego de reactivos para la determinaci�n de hierro, de fabricaci�n nacional¹⁶. La cristaler�a y los materiales pl�sticos utilizados se trataron previamente con una disoluci�n de �cido clorh�drico al 1,2 mmol/l, y agua desionizada; en ning�n momento se emplearon materiales met�licos, para evitar todo tipo de interferencia. Las condiciones de trabajo seguidas fueron las publicadas en el prospecto del reactivo utilizado, y las lecturas se realizaron en un espectrofot�metro Spekol 11. Los resultados se registraron en una hoja de c�lculo de Excel, perteneciente al paquete Office 2007, y para el procesamiento estad�stico se emple� el programa SPSS 15. Con todos estos elementos, se determin� como intervalo de referencia para nuestro laboratorio la media aritm�tica � 1 desviaci�n est�ndar (X � 1 DE).

 

 

Resultados

 

 

Las 91 muestras seleccionadas fueron procesadas con las condiciones descritas anteriormente. Los valores de hierro s�rico encontrados oscilaron entre 7,11 �mol/l y 42,59 �mol/l. La concentraci�n de hierro media calculada en la muestra fue de 22,78 �mol/l y la desviaci�n est�ndar determinada de 7,62. Con estos datos, se propuso como intervalo de referencia para la determinaci�n de hierro s�rico por el m�todo descrito, un rango entre 15,16 �mol/l y 30,40 �mol/l, (X � 1 DE), para el laboratorio de la UNIB, en sus condiciones de trabajo.

Para aceptar este intervalo, se requiere que la muestra tenga una distribuci�n normal; para comprobarlo, se aplic� la prueba de Kolmogorov-Smirnov con correcci�n de la significaci�n Lilliefors, y se obtuvo un valor del estad�grafo de 0,061 y una significaci�n asociada p = 0,200 (p > a), por lo que se concluye que las concentraciones de hierro se distribuyen normalmente en la muestra seleccionada.

Se presenta el histograma de frecuencia de los valores de hierro determinados en la muestra (Figura).

 

 

Se realiz� una distribuci�n de los valores de concentraci�n de Fe seg�n el sexo. Los resultados de la estad�stica descriptiva para ambos grupos aparecen en la siguiente tabla.

 

Tabla Estad�grafos descriptivos seg�n sexo.

 

 

Para los dos grupos se comprob� la distribuci�n normal, en este caso mediante la prueba de Shapiro-Wilk, y se encontr� en ambos una p > 0,05. Para demostrar si existen o no diferencias significativas entre las medias calculadas para ambos sexos, se realiz� una prueba de hip�tesis, y se calcul� la t de Student para dos muestras independientes, teniendo en cuenta el presupuesto de normalidad. El valor del estad�grafo fue de 0,107 y la significaci�n asociada 0,915. Se concluye que no existieron diferencias significativas entre los valores de hierro de reci�n nacidos hembras y varones.

 

 

Discusi�n

 

El intervalo de referencia determinado en las condiciones de trabajo del laboratorio de la UNIB con este m�todo, muestra valores cercanos al rango establecido por el fabricante del juego de reactivos empleado (8,95 �mol/l a 30 �mol/l), aunque se comprob� una diferencia en el l�mite inferior, que en este caso queda por encima del publicado. Para entender esta diferencia, se deben tener en cuenta varios factores.

Se trata de una matriz diferente, es decir, la muestra no es sangre de adulto, sino de cord�n umbilical, que posee caracter�sticas propias. La placenta y el cord�n umbilical constituyen la uni�n primaria entre el feto y la madre. Al final de su desarrollo, el cord�n umbilical presenta dos arterias y una vena; la vena contiene sangre arterial y las dos arterias, de menor calibre, conducen sangre venosa del feto a la placenta. La toma de muestra se obtiene mediante el drenaje por gravedad de la placenta, con esta a�n dentro del �tero, por lo que la muestra contiene una mezcla de sangre arterial y venosa¹⁷. Esto implica diferencias en cuanto a pH, gases disueltos en sangre, y concentraciones de diferentes metabolitos, que podr�an interferir en el resultado de la determinaci�n.

En la muestra estudiada, no se encontraron madres con anemia grave; todas las incluidas recibieron atenci�n m�dica durante el embarazo y tomaron suplementos adicionales de hierro y vitaminas (tableta prenatal). En la mayor�a de los mam�feros se ha podido establecer que el hierro fetal es derivado de la transferrina materna. A menos que sea extrema, la deficiencia de hierro de la madre no afecta la dotaci�n f�rrica del feto, el organismo materno establece como destino preferencial el abastecimiento al nuevo organismo en formaci�n.

La cantidad de hierro que atraviesa la placenta depende de dos factores: el n�mero de receptores de transferrina en el extremo apical de la c�lula y los niveles de ferritina disponibles; la velocidad de transporte depende de las necesidades del feto¹⁸. Cabe pensar, por tanto, que la dotaci�n gen�tica de la madre podr�a influir en la captaci�n de hierro del feto, teniendo en cuenta la cantidad de receptores para la transferrina que se expresen en las c�lulas placentarias responsables de la incorporaci�n de este elemento.

Las concentraciones s�ricas de hierro no difirieron significativamente entre reci�n nacidos hembras y varones en la muestra estudiada. Se conoce que los hombres poseen, como grupo, mayores reservas de hierro que las mujeres, pero la causa de esta diferencia est� relacionada con las p�rdidas c�clicas de la menstruaci�n y no concurren en los reci�n nacidos. En la literatura consultada no se encontr� otra condici�n que relacionara al sexo con los niveles s�ricos de hierro, �aunque s� se han descrito valores diferentes de ferritina s�rica para los sexos en el per�odo fetal/neonatal, espec�ficamente se han informado valores superiores de esta prote�na para el sexo masculino¹⁹. En todo caso, con respecto a la variable que se analiza en este estudio, nuestros resultados coinciden con lo esperado, por lo que puede validarse el intervalo propuesto para ambos sexos.

 

 

Summary

 

During the last years umbilical cord blood has been of scientific interest as a mean of obtaining blood sample in newborns, but also because it is a way of determining some parameters that offer a detailed information of their nutritional and metabolic state. Among the recognized techniques for the determination of iron, ferrozine method results accessible for developing countries like ours. In order to assure a correct interpretation of the results, it is necessary to establish iron reference values of this mineral, taking into account the specific conditions of analysis used. The objective of the current paper is to determine iron reference values in umbilical cord blood samples in newborns of "Mariana Grajales" Gynecobstetric Hospital, using an ultraviolet- visible spectrophotometry that uses ferrozine in work conditions of the Laboratory of Molecular Diagnostic of Biomedical Research Unit. 91umbilical cord blood samples were processed, and values were informed are in correspondence with the published ones in the literature. Statistically, the variable was studied presents a normal distribution for feminine and masculine newborns that is the reason why, the� interval was reported �is valid for both sexes.

 

 

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Recibido: 6 de enero de 2011

Aprobado: 20 de febrero de 2011