CARACTERIZACIÓN DEL SISTEMA HLA CLASE I DE PACIENTES CON INSUFICIENCIA RENAL CRÓNICA

COMUNICACIÓN

 

CARACTERIZACIÓN DEL SISTEMA HLA CLASE I DE PACIENTES CON INSUFICIENCIA RENAL CRÓNICA.

 

 

Douglas Fernández Caraballo1, Ronal Ramos de Armas2, Frank Quintana Gómez3 y Danay Heredia Ruiz4

1. Licenciado en Bioquímica. ISCM-VC.
2. Master en Bioquímica. Instructor. UCVL.
3. Especialista de I Grado en Inmunología. Instructor. ISCM-VC.
4. Técnico en Laboratorio Clínico. ISCM-VC.

 

 

Todo organismo vivo, tanto animales como humanos, presenta antígenos de histocompatibilidad que lo diferencia de otras especies, y dentro de la misma especie de otros individuos. En el ser humano es conocido como sistema HLA (Human Leukocytes Antigens), el cual está constituido por proteínas localizadas en la superficie de las células blancas de la sangre y en otros tejidos del organismo1,2.

Existen dos clases de HLA, bien diferenciadas estructural y funcionalmente; estas son: HLA I y HLA II. Dentro de estas dos clases de HLA se encuentran grupos clásicos, que en el caso del HLA I, son: el A, el B y el C, y en el HLA II: los DP, DQ y DR (3). Cada uno de estos grupos contiene una variada cantidad de proteínas HLA específicas designadas numéricamente, por lo que un individuo puede ser HLA-A1, mientras que otro puede clasificarse como HLA-A24.

Este sistema es heredado codominantemente como un conjunto que contiene los grupos HLA clásicos antes dichos, y recibe el nombre de haplotipo. Un individuo hereda un haplotipo de cada uno de sus progenitores; existe un total de cuatro diferentes combinaciones de haplotipos para una pareja determinada5.

Las múltiples combinaciones que existen entre los diferentes antígenos HLA hacen que una semejanza completa de estos solo se produzca entre gemelos univitelinos, o por el azar, una vez por cada varios miles de trasplantes.

La compatibilidad HLA entre el donante y el receptor mejora los resultados del trasplante a largo plazo, ya que se ha demostrado que los trasplantes realizados con cinco compatibilidades tienen una mejor supervivencia que los que tienen una sola compatibilidad6.

El trasplante renal entre seres humanos puede ser realizado con un órgano procedente de un donante vivo, generalmente entre padres e hijos o entre hermanos, o procedentes de cadáver7,8. Una vez conocido el HLA del donante, -en la donación de vivos se conoce previamente-, se deben buscar los receptores de mejor compatibilidad.

En nuestro trabajo realizamos la caracterización del sistema HLA clase I locus A y B de los receptores de riñón de las provincias de Villa Clara, Sancti Spíritus y Cienfuegos.

El estudio se realizó en linfocitos, los cuales fueron aislados en muestras de sangre total heparinizada, provenientes de 134 pacientes receptores de riñón de las provincias centrales del país.

El aislamiento de linfocitos se realizó a partir de 5 ml de sangre heparinizada, que fueron mezclados con 5 ml de PBS 5X (40 g de NaCl, 7,5 g de Na2HPO4, 1g de KH2PO4, 1g de KCl y 1g de NaN3 pH 7,2-7,4). Posteriormente, un volumen de 5 ml de la mezcla anterior fue colocada sobre 1,5 ml de Ficoll 400/Telebrix (r=1,077 g/cm3) y centrifugada a 1800 rpm, durante 20 minutos a 20oC en una centrífuga refrigerada IEC-Centra-7R. Una vez extraído el anillo de linfocitos con pipeta Pasteur, se procedió a realizar lavados mediante centrifugación a 1800 rpm, por 10 minutos a 4oC, en los que se utilizó PBS 5X y se desechó el sobrenadante.

Después de tres lavados, los linfocitos se diluyeron en 1 ml de PBS 5X y se ajustaron a una concentración de 2000 células/ml.

Una vez alcanzada la concentración de linfocitos requerida, estos fueron sometidos a una prueba de microlinfotoxicidad de Terasaki9. Se emplearon placas de Terasaki de 60 pocillos, previamente preparadas con antisueros para cada especificidad de HLA-A y HLA-B (tabla 1).

La prueba se realizó añadiendo 1 ml de suspensión celular en cada pocillo, con pipeta de Hamilton de 50 ml y se incubó a 22oC durante 30 minutos. Posteriormente, se le suministró 5 ml de suero de conejo como fuente de complemento (BETERA liofilizado), con pipeta de Hamilton de 250 ml y se incubó a 22oC por una hora. Luego se procedió a colorear con eosina (5 ml), se dejó reposar durante 3 minutos, y se concluyó con la adición de 5 ml de formalina (pH 7,4).

Después de transcurridos 20 minutos, se procedió a leer con microscopio invertido de contraste de fase (OLYMPUS). El criterio de positividad de la prueba se obtuvo por el por ciento de lisis celular.

En nuestro trabajo fueron caracterizados un total de 134 pacientes de la región central del país; de ellos, 86 fueron de Villa Clara (tabla 2), 28 de Sancti Spíritus (tabla 3) y 20 de Cienfuegos (tabla 4).

Finalmente, quedó creado el perfil de histocompatibilidad del sistema HLA clase I de los receptores de riñón de la región central del país, lo que nos permite contar con una base de datos para futuros estudios poblacionales de la frecuencia de determinados alelos del sistema HLA en nuestra región, y su relación con enfermedades renales. Asimismo, esta base de datos nos permitirá realizar estudios del comportamiento del trasplante renal en nuestra región y su comparación con otras del país.

 

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

1. Zorn E, Miklos DB, Floyd BH, Mattes-Ritz A, Guo L, Soiffer RJ. Minor histocompatibility antigen DBY elicits a coordinated B and T cell response after allogeneic stem cell transplantation. J Exp Med. 2004 Apr 19;199(8):1133-42.

2. Matinlauri IH, Kyllonen LE, Eklund BH, Koskimies SA, Salmela KT. Weak humoral posttransplant alloresponse after a well-HLA-matched cadaveric kidney transplantation. Transplantation. 2004 Jul 27;78(2):198-204.

3. Koelman CA, van Beelen E, Witvliet MD, Doxiadis II, Claas FH. Determination of acceptable HLA mismatches in highly sensitised patients by soluble HLA class I ELISA inhibition. Transplantation. 2000 Feb 27;69(4):656-60.

4. Bodmer WF. HLA polymorfhism: origen and maintenance. En: Bidwell JL, Navarrete C, editors. Histocompatibility testing. London: Imperial College Press; 2000. p. 1-9.

5. Gloor JM, DeGoey S, Ploeger N, Gebel H, Bray R, Moore SB. Persistence of low levels of alloantibody after desensitization in crossmatch-positive living-donor kidney transplantation.Transplantation. 2004 Jul 27;78(2):221-7.

6. Visentainer JE, Lieber SR, Persoli LB, de Souza Lima SC, Vigorito AC, Aranha FJ, et al. Correlation of mixed lymphocyte culture with chronic graft-versus host disease following allogeneic stem cell transplantation. Braz J Med Biol Res. 2002;35(5):567-72.

7. Emonds MP, Herman J, Dendievel J, Waer M, Van Damme-Lombaerts R. Evaluation of anti-human leukocyte antigen allo-inmunization in pediatric cadaveric kidney transplantation. Pediatr Transplant. 2000 Feb;4(1):6-11.

8. Hiesse C, Kriaa F, Rousseau P. Immunoabsorption of anti- HLA antibodies for highly sensitized patients awaiting transplantation. Nephrol Dial Transplant. 2000;7:944-51.

9. Terasaki L. Microdoplet testing for HLA B-C and -D antigens. J Clin Pathol. 1978;69-105.

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